Radiation Hybrid Mapping ist eine gentechnische Verfahren , die ursprünglich für den Bau von Langstrecken- Karten von Säuger Chromosomen und die Entdeckung der Ort der genetischen Marker zueinander entwickelt wurde. Radiation Hybrid Mapping in einem statistischen Modell, um die Abstände zwischen Desoxyribonukleinsäure (DNA )-Marker und deren Reihenfolge auf den Chromosomen messen verwurzelt. DNA-Marker sind sehr kurz. Cyclische DNA-Sequenzen innerhalb eines Genoms enthalten . Radiation Hybrid Mapping hat sich für die Lokalisierung menschliche Krankheitsgene im Genom unverzichtbar. Die relative Lage der DNA-Marker in eine physikalische Karte als eine genetische Karte bekannt verschmolzen werden.
Steps of Radiation Hybrid -Technik
Der erste Schritt der Strahlung Hybrid Technik beinhaltet Amplifikation und Reinigung von DNA ähnlich der ersten Stufe in jeder Sequenzierungsprojekt . Strahlung wird dann verwendet, um die DNA in kleinere Segmente unterteilt und diese Segmente werden dann in eine Hybridzelle eingebracht . Die Strahlungshybridzellewird dann gezüchtet, um in großen Mengen gezüchtet werden. Polymerase -Kettenreaktion ( PCR) und Kopplungsanalyse verwendet werden, um den Abstand zwischen den DNA-Markern zu lösen. Sie können ganz einfach auf die Anwesenheit von verschiedenen genetischen Markern zu überprüfen. Je näher die beiden genetischen Marker sind zu einander, desto geringer ist die Wahrscheinlichkeit , die von der DNA - Spaltung Strahlung getrennt werden.
Verfahren /Technik
das Verfahren von Radiation-Hybrid- Technik beinhaltet die Verwendung von zwei verschiedenen Zelllinien, die in einer giftigen Medien nicht überlebensfähig sind . Gene, die die giftigen Medien widerstehen können , wenn sie in einer einzigen Zelle ( durch die Produktion eines Toxin -resistenter Enzym) kombiniert , aber sie enthalten . Die Zelllinie untersucht wird bestrahlt (üblicherweise durch Röntgenstrahlen) , was zu Brüchen in der DNA. Dies bewirkt, dass das Chromosom in mehrere Segmente , die anschließend verschmolzen werden oder mit anderen Zelllinie integriert zu brechen, die einen Hybriden . Da die Hybrid hat Gene aus beiden Zelllinien eingearbeitet und kann die erforderliche Enzym zu produzieren , wird es in der toxischen Medien überleben.
Anbau
Hybridzelle , die überleben können ist nun in großen Mengen angebaut. Dies verstärkt die von der bestrahlten Zelllinie geerbt DNA. Die resultierende Probe wird dann einer PCR unterzogen, um zwei spezifische genetische Marker zu verstärken. Indem die PCR-Produkte auf einem Gel , kann überprüft werden, wenn beide Marker in der resultierenden Zelllinie eingebracht . Die Frequenzen , mit denen DNA-Marker werden in jedem Klon ( kultiviert Probe) beibehalten kann mit statistischen Methoden berechnet werden.
Anwendung
Die erzeugten Karten der Chromosomen für die vielfältigen Arten wie Menschen, Ratte, Maus und anderer Genome ermöglichen die Erzeugung von sehr detaillierten und präzisen Karten zu studieren multifaktorielle Krankheiten. Weitere Anwendungen sind die Bestimmung von Chromosom 26 Standorte der menschlichen Roman voller Länge cDNAs ( chromosomale DNA) .
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