Plaque- Assay -Methode

Ein Test ist ein Verfahren zur Isolierung und Reinigung von Viren und virale Titer ( die niedrigste Konzentration der Virusinfektionresultiert , die in ) zu bestimmen. Ein Plaque-Test , ursprünglich als eine virologische Test wurde entwickelt, um zu messen und zählen die Infektiosität von Bakteriophagen. Nach Biologie - Online.org , wurde es später auch angewendet, um Säugetierviren zählen. Die Fakten

Eine Gedenktafel ist eine konfluente Monolayer-Kultur von Zellen. Es bildet als Folge der Infektion der Zellen mit einem einzigen Viruspartikel nach Biologie - Online.org . Sobald die Zelle infiziert ist , repliziert und schließlich das Virus die Zelle tötet . Außerdem
verteilt die neu replizierte Virus-Partikel , infizieren und töten die Zellen in der Nähe .
Funktion

In einem Plaque-Assay wird die Kultur zunächst mit einem bestimmten Farbstoff gefärbt. Diese Druck Flecken nur lebensfähig (live )-Zellen , nach Biologie - Online.org . Als Ergebnis werden die toten Zellen ungefärbt erscheinen in der Kultur vor dem gefärbten Hintergrund. Derzeit ist die Plaque-Test angewandt, um Zellen, die Antikörper, die Erythrozyten zu zerstören durch Hämolyse produzieren zu erkennen.
Eigenschaften

Erythrozyten sind Zellen (auch als rote Blutkörperchen ), die eine Hämoglobin- und Transport von Sauerstoff und Kohlendioxid im Blut enthalten , aus den Lungen und Geweben. Hämolyse tritt auf, wenn Erythrozyten aufbrechen und lassen Hämoglobin, nach Biologie - Online.org . Als Ergebnis in der Plaque-Test , ist die Grundlage klar Plaque und zeigt an, dass die roten Blutzellendurch die Antikörper hämolytische worden .
Methode Teil I

Ten fache Verdünnungen eines Virus Lager werden vor der Durchführung eines Plaque-Assay und 0,1 ml aliquiots werden an die Zellmonoschichten setzen hergestellt. Diese Mischung wird für eine Zeit inkubiert , so daß das Virus in der Zeit, die Zellen angreifen . Darüber hinaus sind die Monoschichten durch ein Nährmedium , die eine Substanz (meist Agar) enthält bedeckt , nach " Detecting Viren: Ein Plaque Assay" von Vincent Racaniello . Das Nährmedium ein Gel bildet, und nach der Kultur inkubiert , die ursprünglichen infizierten Zellen freiVirusNachkommen. Das Gel zu beschränken , die Ausbreitung des Virus auf die umgebenden Zellen , und als Ergebnis , die infektiöse Partikel erzeugt eine kreisförmige Zone genannt Plaque. Mit der Zeit wächst die Plaque zu einer Größe mit dem bloßen Auge sichtbar und Farbstoffe verwendet werden , um den Betrachtungs verbessern.
Methode Teil II

Der Virustiter wird berechnet Plaque-bildende Einheiten , PFU genannt , pro Milliliter. Sie gezählt und minimiert Fehler , nur Platten, die zwischen 10 und 100 Plaques enthalten, werden gezählt. Außerdem , nach " Detecting Viren: Ein Plaque -Assay ", für alle 100 gezählt Plaques die gleiche Titer wird von plus oder minus 10 Prozent schwanken. Deshalb ist die geschätzte Fehler eines Plaque-Assay ist etwa 10 Prozent , wenn sie richtig durchgeführt wird.