Was ist die Gelelektrophorese

? Gel -Elektrophorese ist ein Verfahren zur Trennung , Identifizierung und Charakterisierung von Mischungen von Proteinen oder Nukleinsäuren. Denaturierten Proben wandern nach Anwendung von Elektrizität in einem dünnen, nassen Gel typischerweise aus Polyacrylamid oder Agarose gemacht . Die getrennten Proben gefärbt , so dass sie gesehen werden können. Gel -Elektrophorese ist in Protein-und Nukleinsäureforschung und in Krankenhäusern verwendet werden, um Proteine ​​oder DNA ungewöhnliche Muster zu identifizieren , um Krankheiten , genetische Defekte und genetischen Beziehungen zu bestimmen. Probenvorbereitung

Wenn ein Detergens, wie Natriumdodecylsulfonat (SDS ) auf eine Protein-oder Nukleinsäure zugegeben , wird das Reinigungsmittel mit assoziieren und entfalten ( denaturierten ) Proteinen und Nukleinsäure. Denaturierung von Proteinen erleichtert ihr Molekulargewicht in der Elektrophorese zu bestimmen. Die erforderliche Probenmenge beträgt typischerweise 100 bis 500 Nanogramm pro Probe Band für Proteine ​​und 5 bis 100 ng pro Bande für Nukleinsäuren in einem Gesamtvolumen von etwa 25 bis 40 Mikroliter.
Gele

Ein Gel , in der Regel aus Polyacrylamid oder Agarose, hergestellt oder gekauft , diese Proteine ​​zu trennen. Das Gel ist ein viel wie Gelatine. Es ist vor allem Wasser, sondern ist solide genug für die Handhabung. Die Gele enthalten Puffer, um den pH-Wert zu steuern. Das Gel ist sehr dünn (1 bis 2 mm) und rechteckig. Eine Seite sieht wie ein Kamm mit einer Menge von fehlenden Zähnen. Die Lücken sind Brunnen genannt .
Probenaufgabe

Orten das Gel in einer Kammer mit Puffer und denaturierte Proteine ​​werden in die Vertiefungen gegeben . Proben bekannter Molekulargewichte werden nach außen Vertiefungen gegeben. Gele werden mit unterschiedlichen Mengen an Polyacrylamid . Ein niedriger Gelstärke (4 Prozent ) besser zur Trennung hochmolekularer Moleküle , während eine höhere Gelstärke (12 Prozent) wird für höhermolekulare Moleküle verwendet . Ein Gradient Gel Gel variiert in Stärke und kann eine breite Palette von Proteinen mit einem Verlust von Auflösung zu trennen.
Die Elektro

Mit dem Anlegen einer hohen elektrischen Spannung , die denaturierten Proteine ​​bewegen sich auf dem Boden des Brunnens. Je höher das Gewicht des Proteins , desto langsamer bewegt . Wenn der Strom ausgeschaltet ist, die Proteine ​​nicht mehr bewegen . Man entfernt das Gel aus der Kammer und rockt es in einer Schale mit Farbstoff . Organische Farbstoffe wie Coomassie-Blau -oder Metall Farbstoffe auf Fleck Proteine ​​verwendet werden, während fluoreszierende Farbstoffe wie Ethidiumbromid für Nukleinsäuren verwendet .
Analyse der Ergebnisse

Mit dem Entfernung von überschüssigem Fleck , kann man sehen , dass Mischungen in Bands, die wie Leitern aussehen zu trennen. Die Lage der Bänder ist mit dem Abstand von der Standards bewegt, um das Molekulargewicht der Probe in jedem Band zu bestimmen. Das Gel kann mit Alkohol entwässert und getrocknet, so sie gespeichert werden können. Die Farbintensität der Band kann dann gemessen, um die Konzentration des Proteins in jedem Band zu bestimmen.
Protokoll Entwicklung

Standard- Protokolle sind für die Arbeit mit gut verfügbar bekannten Proteinen. Wenn ein Forscher mit einer unbekannten Probe arbeiten, kann das Gel Stärke, Art Puffer , pH -, Spannungs- , Laufzeit, und Flecken alle müssen optimiert werden, um die beste Trennung und Signal erhalten.
Protokolle