Wie Agarplatten Vorbereiten

Molekularbiologie und Bakteriologie Verwendung Agarplatten zur Kultur von Mikroorganismen , wie Bakterien für Experimente. Der Agar ist das Mittel, das verfestigt oder Gels , einer durch den Mikroorganismus erforderlich ist, um überleben und wachsen flüssigen Nährmedium . Einmal auf einer Agar- Platte überführt , wachsen die Bakterien in verschiedene Kolonien oder Schmierer (wenn bei niedrigen Konzentrationen gewachsen ) kann (wenn bei hohen Konzentrationen gewachsen ) und für die Analyse geerntet werden. Biologen vorzubereiten Agar-Platten , wie der Prozess erfordert Zugang zu Labor -Grade- Reagenzien und Maschinen und ein gutes Verständnis der Molekularbiologie und Steriltechnik . Was Sie
Handschuhe
Laborkittel
Gesichtsmaske
Bunsenbrenner
Laminarströmungshaube
Sterile Petrischalen Brauchen
10g Bactotrypton
5g Hefe-Extrakt
15g Agarose
1 ml 1 N NaOH
Steriles, destilliertes wasser und Glasflasche
Autoklav Band
Autoklav
Zuschläge , z. B. Antibiotika wie Ampicillin
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Setzen Sie auf die richtige Schutzausrüstung , einschließlich der Handschuhe , einen Laborkittel und eine Gesichtsmaske , und zu dekontaminieren, alle Oberflächen . Arbeiten neben einem Bunsenbrenner oder vorzugsweise in einem sterilen Abzug mit laminarer Strömung . Dies verhindert, dass Verunreinigungen aus der Luft vor dem Absturz in den Agar .
2

Nehmen Sie den Stapel von Petrischalen aus der Verpackung zu sparen , aber für das Umpacken der Agar-Platten . Beschriften Sie die Außenfläche der Schale (nicht der Deckel) mit der Art der Agar und zum Zeitpunkt der Erstellung . Verlegen Sie die Platten als eine einzige Schicht mit den Deckel entfernt , damit Gießen der Agar einfacher.
3

mischen Bacto - Trypton , Hefeextrakt und Agarose zusammen und fügen Sie den Natriumhydroxid (NaOH )-Lösung . In sterilem destilliertem Wasser auf 1 l Nährmedium erhalten. Diese Lösung in einer Glasflasche mit mindestens 1,5 l Volumen . Lose Schraube am Deckel der Flasche und beschriften Sie die Herstellungsdatum und die Namen der Medien. Legen Sie einen Streifen von Autoklaven Band auf der Flasche und es Autoklaven für 25 Minuten . Lassen Sie die Flasche kühl zu nicht weniger als 45 Grad Celsius ( oder es wird vorzeitig aushärten ), aber nicht höher als 50 Grad Celsius. Sie können Flaschen gekühlt lagern und verfestigt Agar bei 4 Grad Celsius und dann warme , bis verflüssigt. Wenn für Ihre speziellen Experiment oder Bakterienstamm erforderlich , fügen Sie die entsprechende Art und Menge der Ergänzung wie Antibiotika. Wenn die Medien zu heiß ist, werden die Ergänzungsmittel zerstört werden , so sorgfältig die Temperatur der Medien zu überprüfen, bevor Sie fortfahren.
4

Gießen Sie eine ausreichende Menge auf die Hälfte Agar - füllen die Teller , während der Agar noch warm und verflüssigt. Sicherzustellen, dass die Oberfläche vollständig bedeckt . Eine übermäßige Menge Schütten Sie keine oder lassen Sie die Agar erreichen die Spitze der Schale. Halten Sie die Platten in einer sterilen Atmosphäre , indem der Bunsenbrenner oder Laminarströmungshaube kontinuierlich laufen . Lassen Sie die Platten gesetzt und ersetzen Sie dann die Lider .
5

Trocknen Sie die Agar-Platten für etwa 30 Minuten bis eine Stunde in einem Ofen gesetzt nicht höher als 37 Grad Celsius. Alternativ können Sie diese in der Steril drei Minuten dekontaminiert oder auf einem Labortisch in einer verkehrsarmen Bereich, der nicht zugig für ein oder zwei Tage zu verlassen. Das Trocknen der Platten hält jede Bakterienlösung auf der Agar-Oberfläche aus einfach Verdünnung aus und rutschen , statt Kolonien bilden , die auf dem Agar -Stick platziert .
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vorsichtig die Platten dunkel zu lagern und bei 4 Grad Celsius. Stapeln Sie die getrockneten Agar-Platten mit ihren Böden bis zu erlauben , um die Etiketten klar zu sehen und zu Mikroorganismen und Schmutz fallen auf die Agar-Oberfläche und verunreinigen sie zu verhindern. Legen Sie das Geschirr wieder in ihre Verpackung, mit Alufolie abdecken und kleben Sie die Verpackung geschlossen. Beschriften Sie die Platten verpackt mit ihrem Inhalt und Zeitpunkt der Erstellung . Sie können die Platten für bis zu zwei Monate zu speichern und sollte sie nach, dass zu verwerfen.