Zellgefrierprotokoll

Konservieren von Zellen durch Einfrieren ist für Forschung , Veterinärmedizin und Tierzucht , da sie erlaubt den Zellen, für lange Zeiträume gelagert werden. Das ausgewählte Gefrierverfahren muß jedoch reduzieren oder Beschädigung der Zelle zu verhindern. Die Kryokonservierung Mittel und Verfahren auf Zelltyp abhängen. Vorbereitung

Zellen sollten eingefroren, wenn sie gesund sind und aktiv mit 90 Prozent Überlebensfähigkeit wächst. Vorsicht ist bei der Handhabung und Hochgeschwindigkeitszentrifugation genommen werden und heftiges Pipettieren oder Absaugen sollte vermieden werden, um die Lebensfähigkeit zu erhalten und Zellschäden zu verhindern.
Kryoprotektion

Gefrierschutzmittel ist als Ersatz für die intrazelluläre Wasser verwendet. Das Mittel verhindert, Eiskristalle und Austrocknung in den Zellen auftreten. Sterilisiert Glycerin und Dimethylsulfoxid sterilisiert werden oft in einer Konzentration von 5 Prozent auf 15 Prozent ( Volumen pro Volumen ) in entweder fetales Kälberserum oder Wachstumsmedium verdünnt , je nach Zelltyp .
Freezing und Lagerung

Zellen in der Kältemischung sollte langsam abgekühlt werden. Wenn eine programmierbare Gefrier nicht verfügbar ist, können Kryoröhrchen in Seidenpapier eingewickelt werden oder in Styropor gelegt , die den Gefrierprozess verlangsamen kann . Zellen sollten bei minus 80 Grad Celsius für 24 Stunden aufbewahrt werden und dann in flüssigen Stickstoff für die Langzeitspeicher übertragen .
Auftauen

Gefrorene Zellen sollte schnell aufgetaut werden. Ein Wasserbad bei 37 Grad Celsius verwendet werden. Sorgfalt ist bei Zellen in flüssigem Stickstoff aufbewahrt getroffen werden , aber, wie flüssigem Stickstoff kann die Fläschchen eintreten und beim Auftauen explodieren. Kältemischung sollte in Wachstumsmedium verdünnt werden. Die Lebensfähigkeit der Zellen sollte mit dem Farbstoff Trypanblau und die Zellen als normal kultivierten bewertet werden.