Retrovirus -Infektion Protokolle

mit einem ein RNA-Genom , das in einem Capsid und Lipidhülle eingekapselt ist , Retroviren enthalten Polypeptidketten verbinden sie an Rezeptoren in den Membranen der Wirtszellen, die sie infizieren, zu helfen. Während die meisten Zellen Erbinformation 'in DNA codiert wird , dass von Retroviren in der RNA enthalten ist; Retroviren tragen auch das Enzym reverse Transkriptase , so dass sie auf der Wirts-DNA zu haften. Bestimmte Protokolle werden von Laboratorien in der gezielten Infektion der Zelle DNA mit diesen Viren gefolgt . Vorbereitung der Labor

Bestimmte Laborgeräte und Zubehör sind notwendig, um in den Prozess der Retrovirus-Infektion helfen. Zur Ausstattung gehören ein Pipettenhilfe , 1 -Mann- Pipette , 1 Gewebekultur Haube , 37 -Grad- Celsius und 32 Grad Celsius Inkubatoren und einer Eppendorf- Zentrifuge. Lieferungen mit Gewebekulturplatten , eine Einweg- Pasteur-Pipette , qualifizierte retroviralen Überstand steril filtriert Polybren und steril filtriert Protaminsulfat .
Vorbereitung der Zelle für Infektions

Vor Infektionen, muss die Zielzellen in einer Gewebekultur- Platte aufgeteilt und über Nacht in einem 37 - Grad -Inkubator mit fünf Prozent CO2 inkubiert werden. Der Zweck der Inkubationszeit von Zellen , die 50 % konfluent sind, zu erstellen. Herstellung der Zellen vorher notwendig ist , um sicherzustellen, dass die Zellen für die Infektion Prozess optimiert. Der Nolan Lab der Stanford University empfiehlt, dass Zellinfektion beginnen immer Anfang durch Infektion der NIH -3T3-Zellen , um die Ergebnisse des Tests zu optimieren.
Infektion der Zellen

Nach der Inkubationszeit vorbei ist, sollten die Forscher sicher, dass die Zellen gesund und des rechten Zusammenfluss sind . Verwendung der Gewebekulturabzugwird die Zellmasse abgesaugt und ein viraler Überstand wird auf die Zellen . Einmal aufgetragen , sollte die Platte sein sanft schaukelte hin und her, um sicherzustellen, dass es gleichmäßig verteilt ist. Die Zellen sollten dann Spin- impft , indem sie in der Eppendorf-Zentrifuge und Spinn sie bei 2.500 UpM für neunzig Minuten lang bei einer Temperatur von 30 Grad Celsius. Danach sollten die Zellen bei 32 ° C für ein bis zwei Tage inkubiert werden. Das Virus wird dann mit den extrahierten Zellen ersetzt und in den Inkubator , um überall von drei bis sieben Tage nach der ersten Infektion analysiert werden platziert .