Zell-basierten ELISA- Protokoll

ELISA oder Enzyme-linked Immunosorbent Assay wird als diagnostisches Werkzeug in der Medizin und in der biologischen Forschung verwendet werden, um die Menge eines bestimmten Proteins zu quantifizieren. ELISA- Antikörper verwendet , um das Protein von Interesse und ein Reagens, das eine Farbe erzeugt, detektieren. Die Menge an Farbe bezieht sich auf die Menge des Proteins . Cell Culture

Zellen sollten mit 100 Mikroliter der Wachstumsmedien und die Zellen über Nacht absetzen in die Vertiefungen einer 96 -Well-Platte platziert werden. Wenn Sie die Reaktion der Zellen auf einen Faktor zu studieren , sollten die Zellen unter Serummangel für 24 Stunden und dann mit dem Faktor unter-Studie angeregt werden.
Fixierung und primärer Antikörper

Nach Entfernen des Mediums wurden die Zellen mit einem Fixierungsmittel , wie etwa 3 Prozent Formaldehyd oder Methanol behandelt. Die Zellmembran permeabilisiert werden muss , damit der Antikörper an die Zelle eindringen. Permeabilisierung kann durch die Verwendung von 0,1 Prozent Triton erreicht werden , wenn Methanol ist bisher nicht verwendet worden. Nicht-spezifische Bindung kann unter Verwendung von 10 Prozent fötalem Kälberserum in phosphatgepufferter Kochsalzlösung verhindert werden. Nach der Entfernung des Blocks kann der primäre Antikörper aufgebracht und inkubiert für eine Stunde.
Sekundäre Antikörper und Stain

Entfernen Sie den primären Antikörper und Wasch dreimal. Hinzufügen eines sekundären Antikörpers an ein Nachweismittel , wie z. B. Meerrettich-Peroxidase gebunden . Inkubieren für eine Stunde. Washington hinzufügen Chemilumineszenzsubstrat Lösung . Entwicklung und scannen die Platte für Farbintensität.