MBP Reinigungsprotokolle

MBP oder Maltose -Bindungsprotein ist in der Bakterien Escherichia coli , die in der Darmflora des Menschen und Tieren gefunden. Die Reinigung von MBP beinhaltet eine Reihe von Verfahren auf Bestandteile des Proteins trennt ab. In der Molekularbiologie , ist ein wichtiger MBP Reinigung Verfahren zur Untersuchung der Struktur und Funktion des Proteins . MBP Reinigungsprotokolle umfassen MBP Fusionsproteine ​​Reinigung , Klein MBP -Fusion- und Maltose -Bindungsprotein -Fusion -Tag Reinigung . MBP- Fusionsproteine ​​Reinigung

Während dieses Protokolls , Techniker waschen 20 ml der Polymer Amylose -Harz mit atris Lösung bei pH 7,4 , Natriumchlorid, Mercaptoethanol (ME) und Ethylendiamintetraessigsäure ( EDTA), gemäß Protokollen Online . Zellproben zugegeben , zentrifugiert und Gelelektrophorese analysiert. Die Proben sind auch in einem Analytiker , wo Techniker eluieren oder beobachten Bestandteile der Lösung , während er durch die Chromatographiesäule .
Small Scale MBP -Fusion- Protein Purification

Nach analysiert der hebräischen Universität von Jerusalem , Biologen verwenden das Reagenz Isopropyl bD -1 - (IPTG ) , Spin -Zellkultur für 10 min bei 8000 Umdrehungen pro Minute bei 39,2 Grad Celsius. Später, entfernen sie überstehenden Flüssigkeit und mischen kaltem PBS -Puffer zu der Probe , die in mehrere Röhrchen aufgeteilt und erneut zentrifugiert. Die Proben werden dann bei -112 Grad Celsius gehalten hinteren Analyse.
Maltose Binding Protein Fusion Tag Reinigung

Affinity -Tags werden gentechnisch veränderte Moleküle in der Molekularbiologie eingesetzt zu erkennen und zu reinigen Proteinen. Dieses Protokoll ist eine komplexe Reihe von Verfahren in drei Stufen unterteilt , die den Bau von Poly-Histidin -Protein -Marker ( HisMBP ) gehören ; eine Pilotstudie, die die Löslichkeit des Proteins zu bewerten; und die große Reinigung von MBP -Moleküle , nach Nature Protocols . Abgesehen von E. coli- Proben , Techniker verwenden Ampicillin, Kanamycin, IPTG , Anhydrotetracyclin , Glucose -Monohydrat, Zell-Lyse -Puffer, DNA-Polymerase , PCR-Primer , Tris-Acetat -EDTA und Ethidiumbromid .