Adhärente Zellen Protocol

Zellen in Kultur entweder eine Form in Suspension kultiviert , wie Blutzellen oder Zellen, wie Fibroblasten eine Oberfläche, an der sie anhaften können erfordern. Einige der Oberflächen -Beschichtung in verschiedenen extrazellulären Matrix je nach Zelltyp und Studium erfordern . Alle Zellkulturen benötigen, um durchgeführt werden, sind aseptischen Bedingungen . Optimale Umgebung

Die meisten Zelltypen in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium kultiviert werden , (DMEM ) oder Roswell Park Memorial Institute (RPMI ) mit dem Zusatz von 10 Prozent fötalem Kälberserum , 2 Millimol der Aminosäure Glutamin und Antibiotika , beispielsweise 100 Einheiten Penicillin und 0,1 Milligramm pro Milliliter Streptomycin . Die Zellen werden in ihren Medien in einem befeuchteten Brutschrank bei 37 Grad Celsius und 5 Prozent Kohlendioxid erhalten.
Splitting

Cells sollte täglich für eine Infektion , Tod oder Wachstum überprüft werden . Sobald die Gewebekulturkolben 80 Prozent in Zellen beschichtet , sollten die Zellen geteilt werden, um die Gesundheit der Zellen und der logarithmischen Wachstumsphase zu erhalten. Medien entfernt und die Zellen in phosphatgepufferter Kochsalzlösung gewaschen. Adhärenten Zellen erfordern die Zugabe von Trypsin und Ethylendiamintetraessigsäure ( EDTA) , um die Zelladhäsion Proteine ​​zu entfernen. Sanfte Bewegung sollten die Zellen zu entfernen. Medien muss hinzugefügt , um das Trypsin /EDTA-Lösung zu neutralisieren.
Subkultivierung

Die verdünnten Zellen und tryspin /EDTA -Lösung zentrifugiert, um zu pelletieren und Wasch die Zellen . Die Zellen in Medium resuspendiert und verdünnt und in neue Flaschen wieder ausplattiert werden. Jedes Mal, wenn die Zellen die Zellen aufgeteilt Passagenzahl um eins erhöht .
Medienwandel

Medien sollten durch Entfernen der alten Medien und Ersetzen mit zweimal pro Woche gewechselt werden neue , erwärmt Medien.