Intrazelluläre Färbung Protokoll für die Durchflusszytometrie

Durchflusszytometrie ist ein Werkzeug, das bei der Untersuchung von Zellproteinen ist . Es nutzt die Lichtemission oder Fluoreszenz von den Proteinen in der Zelle. Antikörper oder Sonden mit Fluoreszenz- markiert werden verwendet, um spezifische Proteine ​​zu untersuchen. Durchflusszytometrie verwendet, um eine Reihe von Krankheiten , einschließlich Krebs zu diagnostizieren , sondern ist auch in der medizinischen Forschung . Befestigungs Cells

Zellen sollten festgelegt werden , um die Stabilität der intrazellulären Proteinen zu erhalten. Einige Fixative können wie Formaldehyd oder eiskaltem Aceton verwendet werden. Nach der Fixierung muss die Zellmembran permealized werden, damit der Antikörper an die Zelle eindringen . Detergenzien wie Triton oder NP-40 kann oder eiskaltem Methanol verwendet, um Löcher in der Zellmembran zu machen.
Färbung

Wash -Zellen in der Blockierungspuffer 0,5 Prozent Rinderserumalbumin in phosphatgepufferter Kochsalzlösung , BSA /PBS verdünnt. Zellen werden in Blockierungspuffer unspezifische Bindung zu reduzieren inkubiert. In primären Antikörper in Blockierungspuffer verdünnt und zu verlassen, um bei Raumtemperatur inkubiert , für eine optimierte Länge der Zeit . Mit Blockierungspuffer waschen.
Analyse

den sekundären Antikörper, der mit einem fluoreszierenden Marker beschriftet, bei Raumtemperatur 30 Minuten inkubieren . Um ungebundenen Antikörper Waschzellen zu entfernen in Blockierungspuffer . Spin -Zellen zu einem Pellet und dann in PBS resuspendieren und auf Fluss analysieren Durchflusszytometer .