Kompetitiver Bindungstest Protokoll

Die kompetitiven Bindungsassay ist ein Experiment , das die Bindungsfähigkeit von Proteinen oder Chemikalien für spezialisierte Proteine ​​auf einer Zelloberfläche , die so genannte Rezeptoren bestimmt . Das Verfahren wird auch in der medizinischen Forschung verwendet , sondern ist auch in der Lage zu bestimmen, welche Medikamente an Rezeptoren binden und Rezeptor-Aktivität zu verändern , was wiederum das Verhalten der Zelle ändern. Zellpräparation

Zellen in eiskaltem Phosphat Re -suspend Kochsalzlösung (PBS). Messen Proteinkonzentration auf gleich Protein-Ebene mit Hilfe eines spezialisierten Handel erhältlichen Protein-Test bestätigen.
Assay

hinzufügen Radioaktivität -markierten Protein bekannt, an den Rezeptor binden , die Liganden an die Zelle oder Gewebesuspension . In den Konkurrenten , die das Testprotein unter Drogen-oder Studie ist und Inkubation mit dem radioaktiven Liganden und Zellsuspension . Ein Bereich von Konzentrationen der Testarzneimittel sollten untersucht werden. Nach der Inkubation separaten gebundenen und ungebundenen Liganden und misst Radioaktivität.
Datenanalyse

Die übliche Maßnahme zu bestimmen ist die Hälfte der maximalen Konzentration , die den Rezeptor hemmt anders als IC50 bezeichnet. Dies wird durch Auftragen der Konzentrationen auf einer logarithmischen Skala auf der X-Achse eines Diagramms , während die Y-Achse stellt den Prozentsatz der Inhibierung berechnet ; eine S-Kurve , die eine S-Form ist , erzeugt werden soll . Die IC50 ist die 50 Prozent -Hemmung Punkt und die entsprechende Konzentration aus dem Diagramm abgelesen werden.