Wie kann ich Line- Up für die DNA- Analyse

? Agarose -Gel-Elektrophorese ist die häufigste Methode der visuellen DNA-Fragment -Analyse, die Techniker , um visuell discern DNA-Fragmente nach ihrer Größe ermöglicht . Das Agarosegel erhält ein Magnetfeld , und da DNA hat eine negative Ladung, auf dem positiven Ende des Magnetfeldes bewegt. Kleinere DNA-Fragmente bewegen sich schnell durch das Gel und größere Fragmente bewegen sich langsamer . DNA-Fragmente werden mit einem fluoreszenzEinlagerungsMittelwie Ethidiumbromid bekannt gefärbt. Dies ermöglicht den Vergleich von verschiedenen DNA-Proben der Elektrophorese auf einem Gel . Was Sie bis 2 Prozent
Tris-Borat -EDTA (TBA) , Tris - Acetat -EDTA (TAE) , Natrium-Lithium- Acetat (LA) , Borsäure (SB )-Puffer Brauchen
Agarose -Gel, 0,7 Prozent
Ethidiumbromid
Gel Ladefarbstoff
Gel Elektrophorese Fach
Kammer

Handschuhe Schutzbrille
Pipette
Elektrophorese Kamm
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Vorbereiten einer 0,7 Prozent- Agarose- Gel
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abwiegen 0,7 g Agarose- Pulver und dann in einem großen (250 ml) platzieren Erlenmeyerkolben .
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100ml einer 1X (regelmäßige Stärke) -Puffer ( TAE , TBE , SB -oder LB- Puffer) auf den Erlenmeyerkolben mit der Agarose- Pulver.
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Mikrowelle oder Wärme mit einem Bunsenbrenner für etwa eine Minuten , bis die Lösung klar wird und die Agarose aufgelöst hat.
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den Kolben von der Wärmequelle entfernen und lassen Sie es auf 55 bis 60 Grad Celsius abkühlen.
5 < p > 1 ul ( Mikroliter ) von Ethidiumbromid zu der abgekühlten Agarose-Lösung mit einer Pipette entsprechend großen , in der Regel 1 ml . Schwenken Sie die Lösung zu mischen .
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langsam Gießen Sie das Gel in den Gelträger , wodurch es keine Blasenbildung während dieses Prozesses. Wenn es keine gut versorgt Dämme mit dem Gel Tablett , verwenden Sie Klebeband , um sie zu bilden.
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Legen Sie eine Elektrophorese Kamm vorsichtig in das Gel , wodurch eine feste Position und in der richtigen Orientierung . Elektrophorese Kämme stark von der Anzahl der Zähne haben variieren. Lassen Sie das Gel für etwa 25 Minuten eingestellt
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Tauchen Sie das Gel in dem gleichen Puffer verwendet, um die agaorse Lösung herzustellen - . In diesem Fall eine 1X Puffer. Tauchen Sie das Gel in bis zu 5 ml Laufpuffer .
Vorbereitung und Laden von DNA in der Agarose -Gel für Analysis
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Über 5 bis 10 ul Ihre Probe (n) aus ihren Reaktionsrohrein frische Röhrchen . Im Fall, dass Sie die gesamte Reaktionsmischung verwenden wollen, ist ein frisches Röhrchen nicht notwendig.
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0,2 × Ladepuffer zu jedem Ihrer frischen Probenröhrchen Ihre DNA-Probe enthalten, zum Be hinzufügen.
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entfernen Sie die Elektrophorese Kamm langsam , so dass Sie das Gel nicht brechen oder ein Raum zwischen dem Boden des Gels und dem Gel Fach erstellen.
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fünf hinzufügen 12 ul einer geeigneten DNA-Marker in die erste Vertiefung des Elektrophorese Kamm erzeugt. Ob ein DNA-Marker geeignet ist, hängt von der Größe der Fragmente die Sie von Ihrer Probe erwarten .
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laden fünf bis 10 ul Ihrer Proben in die übrigen Brunnen und ein gleiches Menge des gleichen DNA-Marker in die endgültige gut .
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Platzieren Sie die Elektroden in die Elektrophorese- Kammer , indem Sie die Adern in die richtigen Buchsen in die Kammer und stellen Sie die Elektrode auf 50 bis 150 V
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Lassen Sie das Gel für eine bis vier Stunden.
Analyse der Ergebnisse
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das Gel aus dem Gel Kammer laufen und entfernen legen Sie sie entweder in einem UV- Raum für visuelle Identifizierung oder Platz in einer Maschine, die in der Lage, ein Foto des Gels zu nehmen ist .
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die Marker Abstand der Migration in ihren Brunnen messen .

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die Abstände gegen die Größe der Banden auf semilog Millimeterpapier und zeichnen Sie eine Ausgleichsgerade .
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die Abstände Ihrer unbekannte Bands berechnen .
< br > 20

die Größen Ihrer unbekannte Bands durch Ziehen einer Linie aus der Ferne von Ihrem unbekannte Bands , die die Linie der besten Passform erfüllt reiste schätzen .
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zeichnen Sie eine weitere Linie von diesem Treffpunkt über der Größe Achse .