Wie Cell Viability Messen

In den meisten biologischen Experimenten mit Zellkultur, umfasst ein kritischer Schritt, zu wissen, welche Zellen am Leben sind , und die in Ihrer Probe tot sind. Dye Ausschluss ist die beliebteste Methode zur Messung der Lebensfähigkeit der Zellen . Farbstoffausschluss basiert auf der Theorie , dass lebende Zellen enthalten intakten Membranen und tote Zellen nicht , wodurch tote Zellen nehmen den Farbstoff in das Zytoplasma basiert. Es gibt verschiedene Farbstoffe und Protokolle und die Methoden, die Sie wählen sollten auf den Kosten , Empfindlichkeit , einfache und Länge der Verfahren basieren. Trypanblau ist ein gemeinsames Farbstoff verwendet , um die Zelllebensfähigkeitzu messen, da das Verfahren in fünf bis 10 Minuten durchgeführt werden und kostet nur die Menge an Farbstoff -Reagenz . Was Sie brauchen
0,4% Trypanblau- Reagenz
Hämacytometer
Deckglasmikropipette

Pipettenspitzen
Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung ( PBS)
Lichtmikroskop
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ein Pellet der Zellen erhalten Sie messen .
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Zellpellet in PBS auf ca. 5 x 105 Zellen /ml erhalten . PBS wird verwendet, weil die Lebensfähigkeit Messungen sind genauer , wenn die Zellen in einem Serum -freien Umgebung ; Serum -Proteine ​​können auch färben und geben Ihnen irreführende Ergebnisse .
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hinzufügen gleichen Teilen Zellsuspension in PBS zu gleichen Teilen von 0,4 % Trypanblau , um eine Verdünnung 1 bis 2 (Beispiel erhalten : . 100 ul der Zellen auf 100 ul Trypanblau ) zugeben und durch auf-und Abpipettieren
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Mischung inkubieren weniger als drei Minuten bei Raumtemperatur. Wenn Zellen werden nach etwa fünf Minuten gezählt werden Lebensfähigkeit ungenau aufgrund Zelltod Mit dem Deckglas bereits vorhanden sein .
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, füllen jede Seite einer Hämazytometer Zähler mit der Zellsuspension . In der Regel wird jede Seite nehmen 10 bis 20 ul. .
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Legen Sie die Hämazytometer auf der Bühne eines Lichtmikroskops und konzentrieren sich auf die Zellen .
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jeder Seite die Hämazytometer enthält mehrere Plätze . Zählen Sie die Gesamtzahl der Zellen in einem Quadrat der Hämazytometer . Dann zählen die Anzahl der nicht lebensfähigen (blau) und lebensfähigen (klar )-Zellen getrennt , in dem gleichen Platz .
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der Anteil der lebensfähigen Zellen im Quadrat berechnen , indem die Anzahl der lebensfähigen Zellen durch die Anzahl der Gesamtzellen und mit 100 multipliziert . Tun Sie dies für mehrere Quadrate auf dem Hämazytometer , um eine durchschnittliche Rentabilität Messung zu erhalten .