Antikörper- Markierungsverfahren

Antikörper -Markierungsverfahren sind Techniken, die in den biologischen Wissenschaften verwendet , um die Gegenwart von spezifischen Molekülen zu detektieren. Diese Verfahren nutzen die Beziehung zwischen einem Antigen und Antikörper . Antigene können jedes Molekül, das das Immunsystem erkennt sein . Ein Antikörper ist ein Y-förmiger Protein, das spezifisch ein einzelnes Antigen . Biologen die Bindungsbeziehung zwischen einem Antikörper und Antigen , um die Position eines bestimmten Moleküls in einer Probe zu bestimmen. ELISA

ELISA oder Enzyme-linked Immunosorbent Assay ist eine biologische Labortechnik verwendet, um die Anwesenheit eines Antigens oder Antikörpers zu detektieren. Es wird oft in der medizinischen Diagnostik verwendet werden, um festzustellen, ob ein Patient auf eine bestimmte Art der Infektion ausgesetzt.

ELISA wird die Probe — das Antigen von Interesse — enthält, auf eine Verankerung auszuführen festen Träger in einer Schale . Eine Lösung mit dem komplementären Antikörper an die Schale gegeben, und die Antikörper an das Antigen bindet . Überschüssige Antikörper wird dann weggewaschen und nur die Antigen - Antikörper-gebundenen Paare in der Schale . Dies kann durch Zugabe eines fluoreszierenden Moleküls, das an den Antikörper bindet, und gibt ein optisches Signal , die dann quantifiziert werden können, dargestellt werden. Auf diese Weise kann die Anwesenheit und die Menge des Antigens von Interesse indirekt bestimmt werden.
Western Blot

Ein Western -Blot ist eine andere Art von Technik verwendet, um zu erfassen ein spezifisches Protein in einer Probe zu bestimmen und seine Größe. Zunächst Probenproteine ​​werden durch Größe auf einem Gel mit Gel-Elektrophorese zu verbreiten. An diesem Punkt sind Proteine ​​nicht mit bloßem Auge. Wissenschaftler dann Transfer der Proteine ​​auf eine Membran und eine Lösung , enthaltend den Antikörper gegen das Antigen von Interesse. Nach dem Auswaschen der überschüssigen Lösung wird der Antikörper an das Antigen auf der Membran gebunden.

Hinzufügen eines sekundären Antikörpers bewirkt, daß die ursprüngliche oder primäre Antikörper , Licht zu emittieren . Quantifizierung der Menge des emittierten Lichts können die Forscher die Anwesenheit des Antigens , seine Größe im Vergleich zu anderen Proteinen und ihre relative Konzentration .
Immunhistochemie

Immunhistochemie ist eine Technik , die Forscher , um die Position eines Proteins in einer Gewebeprobe visualisieren . Kleine Scheiben einer Probe vorbereitet und ein primärer Antikörper , der gegen das Antigen von Interesse ist , wird hinzugefügt. Überschüssige Lösung wird entfernt , bevor Forscher fügen hinzu, eine sekundäre Antikörper gewaschen. Dieser Antikörper bindet an das primäre Antikörper - Antigen-Paar und emittiert Licht , Signal die Position des Antigens von Interesse.

Wissenschaftler mit einem Mikroskop sichtbar zu machen , wo das Antigen in der Zelle. Mehrere verschiedene Antikörper , die jeweils spezifisch für ein bestimmtes Protein kann verwendet werden, um die relative Position von mehreren Molekülen in einer Zelle zu bestimmen. Wenn dies das Ziel ist, sind verschiedene farbige Sekundärantikörper verwendet werden, um zwischen den verschiedenen Molekülen von Interesse zu unterscheiden.
Durchflusszytometrie

Fluorescence - activated cell sorting — oder FACS — ist eine Art der Durchflusszytometrie verwendet, um verschiedene Arten von Zellen in einer Lösung zu trennen. Jede andere Art von Zelle "tagged" mit einer speziell für diesen Zelltyp -Antikörper. Jeder dieser Antikörper emittiert eine andere Farbe des Lichts. Maschine rührt die Lösung in einzelne Tröpfchen zu brechen und verwendet einen Sensor , um die Farbe jedes Tröpfchen zu erfassen. Die Maschine sortiert die Zellen durch Lichtfarbe, indem diese auf der Grundlage der Art des Proteins , die sie enthalten . FACS -Methodik ermöglicht es den Forschern zu sortieren und zu quantifizieren Zellen von Interesse , um ihre Forschungsfragen .
Immuno - Elektronenmikroskopie

Normale Elektronenmikroskopie ermöglicht es Wissenschaftlern, die Struktur einer Zelle zu untersuchen bis zu 1 Million Mal vergrößert. Immuno -Elektronen- Mikroskopie nutzt die Eigenschaften der Antikörper-Antigen- Bindung an bestimmte Proteine ​​in sehr dünne Gewebeschnitte visualisieren. Zuerst werden Antikörper mit Goldpartikeln befestigt gelassen , um das Antigen von Interesse bindet. Ein Elektronenmikroskop visualisiert dann die Goldpartikel , den Forschern ein Bild , wo das Protein in der Zelle lokalisiert ist.

Obwohl Immuno- Elektronenmikroskopie ist in der Theorie einfach , ist es technisch schwierig und teuer zu verwenden , Begrenzungs seine Popularität der Einsatz in vielen biologischen Forschungsprogramme.