Western Blots Protokolle

Ein Western-Blots sind eine Art von Protein -Blot , die in den medizinischen Bereich , Biologie -Labors und anderen wissenschaftlichen Disziplinen auf einer täglichen Basis verwendet wird. Western-Blots , wenn sie richtig durchgeführt wird, sind eine Möglichkeit zur Untersuchung der Proteinexpression in Gewebeproben . Weil es Unterschiede in den Parametern für jede Probe sein , gibt es eine Reihe von Protokollen, um genaue Ergebnisse zu erhalten, sollte beachtet werden . Ausführen Wäscht

Nach Inkubation der Membranen in den Antikörperlösungen für die geeignete Zeitdauer , die abhängig davon, welche Antikörperlösung verwendet wird, variiert , EnCor Biotechnology , dass die Membran sollte drei Raumtemperatur wäscht in ziehen TBS . TBS ist eine Lösung , die eine bestimmte Make-up und pH zum Waschen hat . Die Membran sollte zwischen jeder Einführung einer neuen Antikörperlösung gewaschen werden.
Vorbereitung Färbemischung

Nach WesternBlotting.org , die Vorbereitung der Färbemischung unmittelbar vor der Anwendung es wird dem Mitglied die besten Ergebnisse erzielen . Es gibt mehrere Arten von Farblösungen , von denen einige können gekauft werden und von denen einige gemischt werden müssen im Labor. Chemolumineszenz -Färbung nach EnCor Biotechnology, die meisten Informationen pro Fleck , sondern ist auch die teuerste und erfordert eine Dunkelkammer für die Entwicklung . Meerrettich-Peroxidase -Färbung und Alkalische Phosphatase Blotting gibt andere Optionen für die Färbung . Unabhängig davon, welche Methode verwendet wird, der Herstellung der Mischung unmittelbar vor der Verwendung ist unerlässlich.
Mit einem Buffer

Nach dem Auftragen der Farblösung ausgewählt , die Verwendung einer Puffer -Taste. In Chemolumineszenz-Färbungen , die Anwendung über ein Acetat oben auf der Farblösung ist Protokoll , nach WesternBlotting.org . Meerrettich- Peroxidase-Färbung erfordert die Verwendung einer Ammoniumacetat-Puffer , um die Braunfärbungzu erhalten. Die alkalische Phosphatase in Blotting -Puffer verwendet , die eine lila Färbung Produkt zu erstellen sollte , ist komplizierter zu machen und kann schon gemacht erworben werden.