T- Cell Culture Protocols

T- Zellen, die zu einer Familie von Immunzellen, Lymphozyten gehören, während einer adaptiven Immunantwort erzeugt. T- Zellen von Knochenmark-Stammzellen und reifen im Thymus . Es gibt mehrere verschiedene Typen von T- Zellen, die jeweils mit einer anderen Funktion . T- Zellen sind voneinander durch die beigefügte T- Zell-Antigen- Rezeptor aus . Eine Untergruppe von T- Zellen , die den CD4 -Marker trägt und hilft, eine Immunantwort zu induzieren. Quellen von T- Zellen

T- Zellen können aus verschiedenen Quellen erhalten werden , einschließlich der Milz, Lymphknoten und Thymus, peripherem Blut , sondern ist die leicht verfügbare Quelle von T- Zellen für die Zwecke Kultur . Blutproben werden gründlich auf Infektionen und andere Verunreinigungen überprüft und vorsichtig unter einer Sicherheitswerkbank abgewickelt. T-Zellen sind aus verschiedenen Gründen , einschließlich Toxizitätsmessungen und immunologische Reaktionen zu studieren Impfstoff kultiviert.
Isolation

T- Zellen werden üblicherweise aus Vollblut durch die Dichte getrennt Gradienten - Trennung , wie T- Zellen sind weniger dicht als die roten Blutzellenwie Erythrozyten und damit durch Zentrifugation extrahiert. Eine geeignete Neutralsalzlösung wird zu der Blutprobe hinzugefügt wird, gefolgt von einer Lösung von Ficoll Isopaque . Ficoll- Isopaque eine Dichte größer als T- Zellen , aber weniger als Erythrozyten und während der Zentrifugation bildet eine mittlere Schicht zwischen den beiden Zellen , so dass T- Zellen, die von der Oberseite entfernt werden. Die T- Zellen werden weiter zentrifugiert , der Überstand wird entfernt, und ein kleines Aliquot wird gezählt, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu bestimmen. Die Zellen werden entweder direkt für Experimente oder kryokonserviert für die zukünftige Verwendung eingesetzt.
Kryokonservierung

Kryokonservierung Reagenzien werden im Voraus vorbereitet , um T-Zell- Abbau bei Raum vermeiden Temperatur. Falls dies nicht möglich , werden die Zellen auf Eis gelagert oder gekühlt . Reagenzien bestehen aus Zellkulturmedien und 10-13 Prozent Humanserumalbumin (HSA )-Proteins , sowie Zellkulturmedienund 10 Prozent Dimethylsulfoxid (DMSO). DMSO minimiert Dehydrierung, pH- Veränderungen und Elektrolytkonzentration Änderungen Einfrieren zugeordnet ist. T- Zellen sind in der Reagens enthaltenden Zellkulturmedien und HSA in Kryoröhrchen suspendiert. Das Reagenz enthaltenden DMSO wird langsam auf die Zellen gegeben und sanft verwirbelt. Die Zellen werden dann in einem Gefriergefäß mit Isopropanol überführt , um eine allmähliche Temperaturabnahme zu gewährleisten und gespeichert.
Auftauen

Wenn T- Zellen werden aufgetaut, ein Kryoröhrchen wird entfernt Lagerung und bei 37 Grad Celsius inkubiert. Anschließend wird die entsprechende Auftaumedium langsam zu den Zellen zugegeben, bis das doppelte Volumen erreicht ist, wird in ein getrenntes Röhrchen überführt und zentrifugiert. Benzonase wird manchmal das Auftauen Medium zugegeben , um die Verklumpung der Toten T- Zellen zu verhindern . Das zentrifugierte Pellet wird in Zellkulturmedien reagiert und die Lebensfähigkeit der Zellen beurteilt. Die T-Zellen sind dann bereit, für entsprechende Experimente zu verwenden.