NBT- Assay-Protokolle

NBT oder Nitro -Blau-Tetrazolium ist eine chemische Verbindung, die in der Biochemie und Immunologie zum Nachweis des Enzyms Alkalische Phosphatase verwendet . Die Substanz ist auch in der Diagnostik -Test chronischer granulomatöser Erkrankung , die die Immunabwehr Zellen beeinflußt verwendet . NBT- Assay-Protokolle umfassen Immunoblotting BCIP /NBT- Substratlösung, alkalische Phosphatase und Galactosidase und Detektion von alkalischer Phosphatase-Aktivität im Gewebe. Immunoblotting

Immunoblotting ist eine Technik verwendet, um Antikörper, die die Proteine ​​in der Immunabwehr beteiligt sind, zu erkennen , sagt Susan R. Haynes in " RNA -Protein- Interaktionsprotokolle. " Dies schließt die Verwendung von NBT , als auch Rinderserumalbumin, primären Antikörper 9E10 , Coomassie- Färbelösung , Nitrocellulosemembranen , Tris-Base -Pufferlösung , Ammonium Pro - Sulfat, Natrium-Dodecyl- Sulfat und Wasser gesättigtem Butanol .

BCIP /NBT Alkalische Phosphatase- Substratlösung

Techniker bereiten eine Lösung mit drei Tropfen von 1 Prozent 5-Brom- 4-Chlor- 3-Indolyl -Phosphat ( BCIP ), drei Tropfen von 1,5 Prozent NBT , zwei Tropfen der chemischen Substanz Levamisol und alkalischer Phosphatase (AP )-Puffer bei pH 9,5 , nach dem IHC World Website . Die Lösung wird dann bei Raumtemperatur inkubiert und verfügbar zu bedienen.
Nachweis von Galactosidase und Alkalische Phosphatase- Aktivitäten in Tissue

Galactosidasen sind Enzyme , die brechen kann die Galactosid Molekül in den Bakterien Escherichia coli und anderen Organismen vor. Gemäß Protokoll Online , während dieses Protokoll , Biologen verwenden Ratte mit PBS-Lösung , Glutaraldehyd und paraformaldyde behandelten Zellproben . Dann bereiten sie die Brom- Chlor- indolyl- galactopyranosid oder X -Gal- Reaktionspuffer für die Proben unter Verwendung von Kaliumhexacyanoferrat, Magnesiumchlorid , Natrium- Desoxycholat und das Waschmittel Nonidet P-40 . Techniker können Nitroblautetrazolium (NBT ) anstelle von Kaliumferrocyanid als schnellere Alternative zu verwenden. Zellproben werden später unter dem Mikroskop beobachtet.