N- terminale Sequenzierung Protokoll

Edman-Abbau - ein bekanntes Verfahren zur Identifizierung der N- terminalen Aminosäure eines Proteins - erfordert die Spaltung der Aminosäure, gefolgt von der Identifizierung unter Verwendung von Chromatographie oder Elektrophorese . Automatisierte Prozesse beschleunigen N- terminale Sequenzierung . Die Fakten

Proteine ​​innerhalb einzelner Zellen produziert wirken als Hormone, Enzyme und andere wichtige Regulatoren. Genetische Mutation in einem abnormalen Protein könnte schwerwiegende gesundheitliche Folgen haben .
Prozess

Die N-terminale Aminosäure wird durch Behandlung mit einer von mehreren Reagenzien gespalten, dann hydrolysiert eine separate Aminosäure zu bilden. Dünnschichtchromatographie , HPLC oder Elektrophorese bestimmt die Größe der Aminosäure , und vergleicht sie mit einem bekannten Größenstandards . Die neue N-terminalen Ende des verbleibenden Protein kann ähnlich zur Identifizierung abgespalten werden.
Automation

Applied Biosystems führte die Entwicklung der Automatisierung von Edman-Abbau , die bindet ein gereinigtes Protein auf eine Membran und behandelt sie mit Phenylisothiocyanat . Injiziert die freie Aminosäure automatisch in ein HPLC- System für die Identifizierung.
Komplikationen

Proteine ​​müssen relativ rein und frei von Verunreinigungen zu bleiben, um genau zu bestimmen, die N-terminale Aminosäure . Edman-Abbau Grenzen erfordern große Proteinmoleküle in kleine Peptidketten nicht mehr 50 Aminosäuren fragmentiert .