Wie auf LB-Agarplatten Stellen

Agar ist eine gallertartige Substanz , aus Rotalgen hergestellt und für eine Vielzahl von Zwecken verwendet . Eine der häufigsten Anwendungen ist als Kulturmedium für Bakterien. LB-Agar ist Nähragar , die mit Lysogenie Brühe (LB) kombiniert wurde . Es ist eine allgemein verbreitete Irrtum, dass LB steht für Luria - Bertani . Doch seinem Erfinder , Giuseppe Bertani , stellt in seinem Papier " Lysogenität in Mid- Twentieth Century : P1, P2, und andere Experimentalsysteme ", dass die Initialen wurden immer die Absicht, für Lysogenie Brühe stehen , nicht sein Name und der seines coresearcher , Salvador Luria . LB-Agar ist vielseitig und relativ einfach zu machen. Was Sie brauchen
Für 1 l fertige Medium:
Skala und einem Gewicht von Papieren oder Schalen
1 -L -Messzylinder
1 L destilliertem oder entsalztem Wasser
2 -L -Erlenmeyerkolben
10 g Trypton
5 g Hefeextrakt
5 g Kochsalz noniodized
15 g Agar
Aluminiumfolie
Wasserdicht Ofenhandschuhe
Autoklav oder Dampfkochtopf
Sterile Petrischalen
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1 Verwenden Sie einen Erlenmeyerkolben , die doppelt hält das Volumen des Mediums Sie beabsichtigen , sich vorzubereiten.

Legen Sie die Trypton , Hefeextrakt und Salz in den Erlenmeyerkolben .
2 Achten Sie genau auf den Druck des Autoklaven oder Dampfkochtopf bei der Sterilisation .

Fügen Sie die Zugabe von destilliertem Wasser und Sir oder schütteln, um die meisten der trockenen Zutaten zu lösen.
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In der Agar- und weiter zu schütteln oder umrühren. Alle von der Agar lösen sich nicht auf , aber es ist wichtig, dass Sie die meisten davon in Lösung. Vermeiden Sie große Klumpen von ungelösten Agar , sich in der Unterseite der Flasche .
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Verschließen Sie die Öffnung der Flasche mit Folie.
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Der Kolben wird in einem Autoklaven - sichere Container.
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Gießen Sie etwa 1 cm Wasser in den Behälter .
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Setzen Sie den Behälter und Kolben in den Autoklaven . Gesetzt den Autoklaven für einen Flüssigkeitskreislaufzu sterilisieren und für mindestens 20 Minuten. Wenn Sie einen Schnellkochtopf für die Sterilisation , gehen Sie zu Schritt 8 fort. Andernfalls fahren Sie mit Schritt 10 fort.
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Wenn Sie mit einem Schnellkochtopf , legen Sie eine kleine Menge Wasser in den Kocher und den Kolben mit im Wasser. Versuchen Sie nicht, mehr als 250 ml zu einem Zeitpunkt, zu sterilisieren mit dieser Methode.
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Bringt den Schnellkochtopf auf etwa 20 psi und sterilisieren Sie für etwa 30 Minuten.
10 < p > entfernen Sie den Kolben aus dem Autoklaven oder Dampfkochtopf, die Betreuung während der Kolben wird sehr heiß sein.
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die Flasche vorsichtig schwenken , sobald die Sterilisation abgeschlossen ist. Dies wird die Agar gleichmäßiger zu verteilen gesamten Lösung .
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die Flasche auf einer geeigneten Oberfläche setzen und lassen Sie es ein bisschen abkühlen. Wenn Sie ein oder mehrere L Medium vorbereitet haben , geben Sie ihm eine sanfte Wirbel alle 10 bis 20 Minuten. Sie werden in der Lage zu sagen , dass das Medium ausreichend abgekühlt ist , wenn man die Rückseite der Finger gegen die Flasche für ca. 2 Sekunden ohne daß es unangenehm heiß an zu halten. Warten Sie etwa 15 bis 20 Minuten , bevor Sie versuchen diese .
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Legen Sie eine Petrischale auf einer ebenen Fläche . Heben Sie den Deckel in einem Winkel , so dass die meisten der Schale bedeckt ist links . Den Deckel heben Sie nicht direkt von der Platte .
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das Medium aus der Flasche in die Petrischale gießen , bis das Gericht über halb voll.
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sofort austauschen der Deckel , bewegen Sie den Teller beiseite und ziehen weiter zum nächsten , bis alle gewünschten Platten gefüllt wurden . Die Platten werden ihre Erstarrung in ca. 30 Minuten zu beenden.
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die Petrischalen Platz in der sterilen Beutel in dem sie angekommen sind oder einem anderen geeigneten , sterilen Behälter , wenn Sie sie nicht sofort Impfen . Verschließen Sie den Behälter , um Feuchtigkeit zu bewahren. Beschriften Sie die Platten , wenn gewünscht. Wenn Sie die Platten speichern , sollten sie bei einer Temperatur von etwa 39 bis 40 Grad F.

gehalten werden