Co- Immunpräzipitation Protokoll

Co - Immunpräzipitation Protokoll ( Co - IP) ist ein weit verbreitetes Verfahren, um Protein-Wechselwirkung zu untersuchen. Das Verfahren wird im allgemeinen aus drei Schritten. Ein Antikörper an einem Zelllysat bracht wird der Antikörper -Protein-Komplexes chemisch gebunden ist und das Protein wird durch Analyse identifiziert. Co- Immunpräzipitation Zusammenfassung

Co - IP aus einer Reihe von Schritten umfasst , um genaue Testergebnisse zu gewährleisten. Der erste Schritt erfordert eine spezifische Protein -Antikörpers zugegeben werden . Im zweiten Schritt , Protein -G oder Protein -A -Sepharose verwendet wird , um den Antikörper -Protein-Komplex binden. Schließlich Sequenzierung eines gereinigten Proteinbande oder die Western-Blot- Analyse wird verwendet, um die gemeinsam ausgefällt Protein zu identifizieren .
Allgemeine Schritte

Das Protokoll können unterteilt werden in drei allgemeine Schritte in Zeit der Mechanik des Prozesses. Der erste Schritt ist , den Arbeitsablauf des Verfahrens in kürzester Zeit durchzuführen. Der zweite Schritt ist allgemeine Betrachtungen für das Verfahren. Der letzte Schritt ist die Fehlersuche.
Spezifische Schritte

Der Arbeitsablauf beginnt mit der Vorbereitung der Kultur für die Blotting- Analyse und schließt mit der Feststellung der Anwesenheit von einem Proteinen. Allgemeine Überlegungen aus Schlüsselschritte wie Vorreinigung der Wahl der Puffer und die Auswahl der Protein-A- oder Protein G -Harz. Fehlerbehebung beschäftigt sich mit Themen wie kein Nachweis von Protein , die Bindung der Antikörper , Proteine ​​, Antikörperfragmente und die Möglichkeit eines erfolglosen Co - IP .