Wie man die Konzentration der Enzyme Amylase -Test

Amylase Enzyme sind in der Bauchspeicheldrüse und in den Speicheldrüsenproduziert und zu verdauen und verarbeiten Kohlenhydrate. Wenn die Bauchspeicheldrüse erkrankt ist Amylase in den Blutstrom freigegeben. Wenn ein Patient erfährt Verdauungstrakt Probleme oder gibt es Erkrankungen der Bauchspeicheldrüse , wird der Arzt einen Bluttest , um das Niveau von Amylase im Blut zu etablieren. Die Überwachung der Amylase Enzymspiegel viel Information über das Fortschreiten der Erkrankung und die Auswirkungen der Behandlung zu erhalten. Was Sie brauchen
UV /Vis -Spektralphotometer
15 große Reagenzgläser
Reagenzglasgestell
1 mg /ml Stärkelösung
De - ionisiertes Wasser
KI /Iodreagens
Pipetten
Dropper
Tissue
Küvetten
Millimeterpapier
Blutprobe
Centrifuge
Stoppuhr
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Herstellung eines Standard- Stärke Curve
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auf dem Spektralphotometer Drehen und stellen Sie es auf einer Wellenlänge von 620 nm auf. Lassen Sie das Instrument zum Aufwärmen für mindestens 10 Minuten, so dass die Antwort wird während des Experiments stabil sein.
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aus sechs Reagenzgläser Set , beschriften Sie sie 1-6 und legen Sie sie in einem Test Rohr -Rack. Ordnen Sie die Lösungen von Stärke, VE- Wasser und KI /Jod-Lösung auf der Bank oben
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Füllen Rohr 1 mit 3 ml de - ionisiertes Wasser mit einer Pipette . dies wird als Rohling zu dienen. Füllen Röhren 2-6 mit 3,0 ml , 2,9 ml, 2,7 ml, 2,4 ml und 2,1 ml de - ionisiertem Wasser auf. In Stärkelösung zu jeder der Röhren 2-6 in der folgenden Reihenfolge : Rohr 2 bekommt 0 ml, Rohr 3 bekommt 0,1 ml, Rohr 4 bekommt 0,3 ml, Rohr 5 bekommt 0,6 ml und Rohr 6 bekommt 0,9 ml
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ein Tropfen KI /Jod-Lösung zu jeder der sechs Rohre hinzufügen. Jedes Rohr vorsichtig mischen vor der Aufnahme ihrer Absorption im Spektralphotometer .
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Füllen Sie die Küvette mit der Blindlösung , reinigen Sie die Außenseite der Küvette und legen Sie sie in das leere Loch des Spektrometers . Stellen Sie die Extinktion Null. Alle anderen Lösungen einen positiven Absorption ergeben.
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Füllen Sie die Probe Küvette mit jeder der anderen fünf Lösungen der Reihe nach. Wischen Sie die Außenseite der Küvette vor jeder Messung . Notieren Sie sich die Absorptionswert für jede Röhre . Mit der neuen Lösung Spülen Sie die Küvette mindestens einmal vor dem Befüllen für den Test.
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Machen Sie eine Grafik , die die Absorptionswerte gegen Stärkekonzentration aufgetragen ist. Dies ist der Standardkurve , die Sie , um die Konzentration einer Lösung , die eine bestimmte Absorptionswert hat bestimmen können .
Bestimmung Amylase Konzentration
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alle Reagenzgläser aus Reinigen der erste Teil des Tests. Bewahren Sie das Leerrohrfür die spätere Verwendung .
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eine Blutprobe des Patienten erhalten . Legen Sie die Probe in einer Zentrifuge und trennen Sie die roten Blutzellen aus dem Blutplasma.
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ein Reagenzglas mit 9 ml entionisiertem Wasser und 1 ml Blutplasma Fill. Dies ist eine 1:10 Verdünnung des Plasmas. Das Rohr gründlich mischen und Pipette 1 ml der Lösung in ein zweites Teströhrchen . Beschriften Sie die zwei Röhren mit ihrem Inhalt .
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Bereiten Sie eine zeitgesteuerte Test durchzuführen. Haben Sie eine Stoppuhr handlich und sieben Reagenzgläser mit Küvetten im Reagenzglas Rack gesetzt . Sie nehmen Messwerte alle zwei Minuten , sobald der Test beginnt . Notieren Sie die genaue Zeit und Absorptionswert für jede der sieben Datenpunkten. Füllen Sie jedes der sieben Teströhrchen mit 2 ml de - ionisiertes Wasser .
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9 ml der Stärkelösung in das Reagenzglas , das die 1 ml der 1:10 Verdünnung von Plasma hat hinzufügen. Sobald Sie mit dem Hinzufügen der Stärkelösung zu beginnen, starten Sie die Stoppuhr. Mischen Sie das Reagenzglas und Pipette gut 1 ml der Stärke /Plasma- Lösung in die erste von sieben Reagenzgläser. Notieren Sie sich die Zeit . 1 Tropfen KI /Jod-Lösung in das Reagenzglas und mischen.
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Überweisung in die Küvette , wischen Sie die Außen auswerten und Absorption . Wiederholen Sie den Vorgang mit den restlichen sechs Reagenzgläser Abständen von zwei Minuten . Am Ende des Zeittestsollten Sie Messwerte für die aktuelle Zeit und Absorption haben für die Zeiträume von 0 , 2, 4 , 6, 8 , 10 und 12 Minuten.
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Verwenden Sie die Standard- Kurve , um die Konzentration von Stärke für jede der sieben Datenpunkte zu finden. Diese Punkte werden mit der Zeit abzunehmen . Die Amylase verdaut die Stärke und im Laufe der Zeit verbraucht all die Stärke erhältlich.
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Diagramm die Datenpunkte für die zeitgesteuerte Test als Stärkekonzentration über der Zeit. Die Steigung dieser Kurve gibt die Menge der Amylase in der Plasmaprobe .