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Setzen Sie auf ein Paar Latexhandschuhe aus Nitril oder die LB-Brühe vorbereiten. LB-Medium ist eine häufige Abkürzung für Lysogenität Brühe oder Luria-Brühe , und da verwendet als Wachstumsmedium für die Kultivierung von Bakterien es ist. Es kann von Grund auf im Labor gemacht werden , um Zeit zu sparen oder es kann von jedem molekularbiologischen Lager Anbieter erworben werden .
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Legen Sie ein Blatt Papier mit einem Gewicht auf die Waage. Drücken Sie die Nulltasteauf der Waage , so daß das Gewicht des Papiers nicht im Endgewicht enthalten. In kleinen Mengen Trypton zu einer Zeit , bis der Sie 10 g erreichen. Dann die wiegen Papier in der Mitte mit dem Trypton in der Mitte. Nehmen Sie das Papiergewicht und sorgfältig verwenden das gefaltete Papier wie ein Trichter , um den Trypton an die 2 -l-Kolben hinzuzufügen. Gehen Sie folgendermaßen vor , um 5 g Hefeextrakt, 10 g NaCl und 15 g Agar wiegen.
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Tropfen den Rührstab in den Kolben und der Kolben zentrieren auf der Magnetrührplatte . Fügen Sie genug destilliertes Wasser , um die Lösung auf 1 Liter zu bringen.
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Schalten Sie die Platte für Aufsehen , und beobachten Sie den Rührstab . Die Platte sollte mit der richtigen Geschwindigkeit eingestellt werden, dass der Rührstab , um in einem moderaten Tempo , ohne sich an den Seiten der Flasche stecken zu bewegen. Passen Sie die Einstellungen , wenn nötig. Lassen Sie die Lösung auf der Platte sitzen, bis alle Reagenzien aufgelöst haben .
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Schalten Sie den Aufsehen Platte , und strecken Sie ein 3- Zoll-Quadrat Stück Parafilm über die Oberseite des Kolbens , um decken und der Kolben von allen Verunreinigungen oder Verschütten zu schützen. Dann decken Sie die Parafilm mit einem Stück Aluminiumfolie und fügen Sie ein Stück von MarkierungsbandAutoklaven auf der Folie.
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Legen Sie die Lösung in einem Autoklaven auf Flüssigkeitskreislauf für 20 Minuten bei 15 psi bis sterilisieren .
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die Flasche aus dem Autoklaven entfernen . Es wird sehr heiß. Lassen Sie die Lösung auf etwa 55 Grad Celsius abkühlen , indem sie sitzen bei Raumtemperatur , oder indem der Kolben in einem 65 Grad Celsius Wasserbad.
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Spray und wischen Sie die Arbeit Oberfläche mit 95 Prozent Ethanol , um eine Kontamination zu verhindern. Es ist auch eine gute Idee, die Handschuhe vor dem Umgang mit der Platten ändern.
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die Seite und Deckel jeder Platte mit vertikalen blauen Band mit dem Markierungsstift markieren . Dies zeigt die Platten enthalten LB-Brühe und Chloramphenicol .
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Fügen Sie genug Antibiotikum Chloramphenicol zu der Lösung, so dass die Konzentration die gewünschte Menge erreicht, abhängig von den Bakterien , mit denen man arbeitet . Eine gemeinsame Endkonzentration 100ug/ml . Für diese Konzentration , fügen Sie 1 ml Chloramphenicol Lager ( bei 25mg/ml ) . Schwenken Sie die Flasche in einer kreisförmigen Bewegung , oder setzen Sie ihn wieder auf der Magnetplatte für Aufsehen : 1 bis 2 Minuten, um sicherzustellen, dass es gut vermischt ist.
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mit Ethanol Wischen Sie die Mündung der Flasche , und anschließend die Lösung auf den Platten , bis sie halb mit der Lösung gefüllt sind. Lassen Sie die Platten aushärten , decken Sie jede Platte mit einem Deckel , und speichern sie auf den Kopf bei 4 Grad Celsius , um sie vor dem Austrocknen zu verhindern.
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