Paraffineinbettung Protokoll

Wissenschaftler müssen in der Regel mit biologischen Proben in Abschnitt sie ab verfestigen. Dies erleichtert es den Wissenschaftlern, Farbstoffe , Antikörper und Sonden zur biologischen Probe hinzuzufügen. Es reduziert auch die Überlagerung von verschiedenen Zellschichten . Wissenschaftler nutzen Paraffinwachs als Hartmatrix für die Schneid , da das Paraffin nicht mit Wasser mischen. Paraffin ist eine Art von Kohlenwasserstoff. Die biologischen Proben enthalten Wasser, so die Wissenschaftler , müssen die Proben mit immer mehr konzentriert Ethanol Bäder entwässern. Xylol

Wissenschaftler das Ethanol mit Xylol . Dann verwenden sie geschmolzenes Paraffinwachs , um das Xylol zu entfernen. Für die Lichtmikroskopie sind die Paraffinschnitte in der Regel fünf um dick. Paraffin ist nicht hart genug für dünnere Scheiben schneiden. Wissenschaftler rehydrieren das Gewebe durch Verwendung von Xylol , dann Ethanol . Dann werden sie mit destilliertem Wasser spülen der biologischen Probe , um eine Kontamination zu vermeiden.
Fixing

Paraffin eingebetteten Geweben sind in der Regel mit neutral gepufferten Formalin, die die kommerzielle Version ist fixiert Formaldehyd. Dazu gehören Paraformaldehyd und Methanol, welches die Umwandlung von Formaldehyd in Ameisensäure verhindert. Dünn geschnittenes Gewebe müssen 48 Stunden nach der Fixierung bei Raumtemperatur für eine optimale Histologie, die das Studium der mikroskopischen Anatomie ist . Andernfalls wird das Gewebe verhärten und brüchig werden . Vor der Verarbeitung wird das Gewebe in der Regel in 70 Prozent Ethanol bei einer Temperatur von 4 Grad Celsius gelagert .
Paraffin Prozessoren

Wissenschaftler verwenden häufig Paraffin -Prozessoren zu senden das Gewebe durch Bäder, die nach und nach das Material vor heißem Paraffin entwässern kann durch das Gewebe gelangen. Wissenschaftler führen den Prozessor über Nacht . Der Prozessor heizt nur die Gewebe für eine bestimmte Zeitdauer in Abhängigkeit von dem Gewebe , um es nicht hart und spröde werden . Der Prozessor arbeitet mit Unterdruck , das beschleunigt die Permeation von Paraffin-und Luftblasen entfernt . Nach der Verarbeitung werden die Gewebe in Kassetten bei Raumtemperatur gelagert.
Wachsschmelz

Das Paraffin schmilzt eine Stunde vor der Zugabe des Gewebes. Die gesamte Kassette wird in einem 65 Grad Celsius Paraffinbad für 15 Minuten angeordnet . Ein kaltes Aluminium-Kühlkörper kühlt die Paraffinwachs für 20 Minuten. Wenn die Wachs Risse oder die Gewebe nicht richtig ausgerichtet ist, der Wissenschaftler schmilzt das Paraffin und wiederholt den Vorgang .
Schneiden

Beim Schneiden der Gewebe , bekommt der Wissenschaftler das Wasserbad auf 35 bis 37 Grad Celsius. Das Wasser ist frisch und VE . Die Blöcke werden auf einem Eis -Block oder Kühlkörper für 10 Minuten gestellt Gesicht nach unten . Eine Klinge schneidet den Block in einzelne Abschnitte. Zwei Probleme, die auftreten können, sind schlechte Bénderung und Fragmentierung Proben. Wenn die Proben -Fragment , das Wasser zu heiß ist. Ob der Block nicht gut Farbband , sollten Sie es wieder auf den Eisblock und festigen das Wachs vor dem Start noch einmal.