TPA Reinigungsprotokolle

Gewebe-Plasminogen- Aktivator oder TPA ist eine Art von Serin-Protease , das Protein in der Lage , um Blutgerinnsel zu zerstören. TPA wird in den Zellen , die intern decken die Blutgefäße gefunden. TPA Protokolle sind Bestandteil der pharmazeutischen und medizinischen Forschung auf Striche , sowie Herz -und Lungenerkrankungen , wie z. B. Lungenembolie und Herzinfarkt . TPA -Reinigung bezieht sich auf die Isolierung des Proteins von anderen Molekülen durch eine Reihe von Verfahren, einschließlich Chromatographie und Elektrophorese. Reinigung von tPA aus Hog Nieren

Dieses Protokoll wird in Studien der Fibrinolyse verwendet , das Verfahren des Brechens des Produkts von Koagulation genannt Fibrin, zur Bildung von Tumoren stehen. Techniker extrahieren TPA aus Aceton- getrocknete Schweinenierenmit Kalium- Acetat-Puffer bei pH 4,2 . Dann , Ammoniumsulfat fügen sie die Zellniederschlagzu induzieren. Sie fügen hinzu, n- Butyl -Sepharose zu den Proben , die dann auf einem Chromatograph analysiert. Concanavalin A wird auch aufgenommen und chromatograph.y zu verschiedenen Proteinen zu trennen wird durchgeführt.
Reinigung von TPA aus chinesischen Hamsters und E. coli Zellen

Proteinreinheit ist ein wichtiger Faktor für den Erfolg von biologischen Experimenten. Gereinigtes TPA ist auch im Handel erhältlich, das spart Zeit und das Risiko einer Gefährdung der Versuch wegen schlecht gereinigte Lösung vermeiden . Dieses Protokoll umfasst die Reinigungsverfahren von TPA in Säugetier -und Bakterienzellen . Techniker ausfallen Zellproben , sie zu filtrieren und durchzuführen, Affinität und Chromatographie -Analyse. Später , sie analysieren und vergleichen die Ergebnisse , vor der kommerziellen Produktion.
Expression von Active Menschen TPA in E. coli

Aufgeklärt Zelllysaten werden hinzugefügt ein Lysin - Sepharose Säule , in einem Chromatograph analysiert und mit einer Lösung von Natrium- Chlor gewaschen. Eine weitere Probe wird auf einer zweiten Chromatographiesäule, die Proteine, die TPA mit sehr hoher Affinität bindet geladen. Eine Probe aus der zweiten Säule mit einer Lösung von Zink -Sepharose . Das resultierende Protein zeigt mehr als 90 Prozent Reinheit , nach der Fachzeitschrift "Applied and Environmental Microbiology ".