Unterschied zwischen direktem und indirekten ELISA

Ein Enzym -Immunoassay (ELISA) beinhaltet die Umsetzung eines Antikörper- Enzym-Komplex mit einem Antigen oder Antikörper auf einer festen Oberfläche festgehalten wird . Inkubation des konjugierten Enzyms mit einem geeigneten Substrat wird ein Produkt gebildet wird. Die Bildung eines Produkts hilft Anwesenheit des Antigens oder Antikörpers zu detektieren und dessen Menge ein Maß für die Menge an Antigen-Antikörper- Reaktion stattgefunden . Direkt und indirekt : Der ELISA-Test kann in zwei Formen durchgeführt werden. Test-Format

In der direkten ELISA-Test , ein primärer Antikörper an den Wänden einer Mikrotiterplatte statt. Wenn die Probe, die das Antigen enthalten, zugegeben wird, ist eine Antigen- Antikörper-Reaktion . Als nächstes wird ein Enzym-gebundenen sekundären Antikörper, der fähig ist, mit dem Antigen zugegeben. Ist das Antigen in der Probe vorhanden ist , bindet es an diesem Enzym-gebundenen Antikörper . Wenn ein farbloses Substrat wird zugegeben , wenn eine Farbe entwickelt , zeigt dies die Anwesenheit von Antigen . Bei dem indirekten ELISA wird Antigen an den Wänden der Mikrotiter- Platte gehalten . Wenn eine Probe, die Antikörper enthalten, zugegeben wird, tritt eine Antigen- Antikörper-Reaktion . Als nächstes wird ein Enzym-gebundenen sekundären Antikörper, der zur Reaktion mit dem ungebundenen Bereich des Antikörpers zugegeben. Wenn das farblose Substrat zugegeben , um die Entwicklung von Farb es führt , wenn die Probe verwendeten Antikörper enthält .
Freundlichkeit Testing

Eine breite Palette von markierten Sekundärantikörper sind im Handel zur Verfügung. Außerdem ist es möglich, mehrere primäre Antikörper in einer bestimmten Art zu schaffen und den gleichen sekundären Antikörper zum Nachweis . Dies ermöglicht die indirekte ELISA einfach durchzuführen. Im direkten ELISA , müssen die primären Antikörper spezifisch vorbereitet, mit dem spezifischen Antigen vermutet in der Probe vorhanden sein reagieren zu können . Dies macht den direkten ELISA nachteilig im Vergleich zu den indirekten Test.
Schnelligkeit der Prüfung

Die direkte ELISA- Test ist schnell im Vergleich zu den indirekten Test, weil es nur eine einzige Antikörpers. Der indirekte ELISA erfordert einen zusätzlichen Schritt der Inkubation mit einem zweiten Antikörper während der Testvorschrift, die eine Verzögerung bei der Erlangung Ergebnisse verursacht.
Empfindlichkeit

Die direkte ELISA-Test ist weniger empfindlich als der indirekte Form der Test, weil es viel weniger Signalverstärkung . Außerdem kann die Markierung des primären Antikörpers mit einem Enzym, dessen immonoreactivity Profil beeinträchtigen. Im Falle der indirekten ELISA wird der primäre Antikörper nicht markiert und daher seine Immunreaktivität behält sie . Außerdem hat jede primäre Antikörper viele Epitope, die mit dem sekundären Antikörper binden können , dies erlaubt die Verstärkung des Signals , die Verbesserung der Empfindlichkeit der Methode . Jedoch gibt es eine Chance von Kreuzreaktivitäten zwischen dem Antigen und dem sekundären Antikörper , die zu einem Fehler in den Ergebnissen. Es gibt keine Möglichkeit, in der direkten ELISA -Methode.