Protokolle für die Hoechst -Färbung

Die Hoechst Flecken sind fluoreszierende Farbstoffe zur Markierung von DNA und RNA durch Fluoreszenzmikroskopie und Durchflusszytometrie verwendeten Techniken . Hoechst 33258 und Hoechst 33342 sind die am meisten von diesen Flecken. Sie haben die Fähigkeit, die DNA -Moleküle zu binden , wodurch die Kerne und Mitochondrien Fluoreszenz unter ultraviolettem Licht. Protokolle für die Hoechst -Färbung sind gängige Praxis in biotechnologischen Labors und Genetik und umfassen Zellfärbung Techniken sowohl mit Hoechst 33258 und Hoechst 33342 . Hoechst 33342 Färbung HSC -und StammzellaufreinigungProtokoll

Dieses Protokoll wird verwendet, um Zellen von Mäusen Knochenmark färben. Techniker bereiten Knochenmarksprobe mit HBSS + Salzlösung , HEPES -Puffer und fetales Kälberserum . Sie spinnen die Lösung und in den vorgewärmten DMEM Medium. Dann wird Hoechst -Färbung aufgenommen. Die Lösung wird in einem 98,6 Grad Fahrenheit Wasserbad für genau 90 Minuten gestellt , berichtet das Institut für Immunologie an der Universität von Pittsburgh. DNA-Segmente erscheinen unter einem Durchflusszytometer fluoreszierend .
Hoechst 33342 Färbung DNA

Während dieses Protokolls , ausgesetzt Techniker Hoechst 33342 -Färbung in destilliertem Wasser 2 Prozent fetales Kälberserum die Zellprobe , mit Hilfe einer Pufferlösung, wobei der pH bei 7,2 . Die Zellen werden dann bei 98,6 Grad Celsius für eine Stunde nach der University of Michigan Health System inkubiert und sofort mit einem Gerät namens Durchflusszytometer analysiert.

Bunt DNA ist dann sichtbar und Leuchtstofflampen .


DNA- Detektion mit dem DNA-bindenden Fluorochrom Hoechst 33258

Diese Protokolle verwendet ein Gerät namens Spektrophotometer , um DNA- und RNA-Segmente analysieren. Techniker verwenden Hoechst 33258 Arbeitslösung und Kalbsthymus- DNA-Proben . Sie sind auch eine getrennte Lösung unter Verwendung der DNA-Probe und eine Chemikalie namens Ethidiumbromid . Später vergleichen sie die Zellfärbung Ergebnisse in beiden Medien , mit einem Spektrophotometer nach Current Protocols in Zytometrie .