PBMC Protokoll

Kryokonservierte periphere mononukleare Blutzellen (PBMC ) sind eine häufige Quelle von Proben für die Forschung, die Immuntherapien und Reaktionen auf Impfstoffe enthält . Während einige Protokolle zu Isolation und Einfrieren Phasen des Prozesses beschränkt , gehören ua Auftauen Verfahren. Isolierungsverfahren und Gefrierverfahren

Eine kommerzielle Verbindung , um die Trennung zu fördern wird in jedes 50 ml Zentrifugenröhrchen gegeben und die Röhrchen für 30 Sekunden zentrifugiert. Caps von Blutröhrchen werden mit Alkohol vor Öffnung gesprüht , dann Antikoagulans behandelt Vollblut wird dann über eine Pipette in die Zentrifugenröhrchen überführt . Die Plasmaschicht des Blutes wird mit einer Pipette angesaugt.
Einfrieren

Die Zellen aus dem vorherigen Schritt wird dann mit Kochsalzlösung dreimal zentrifugiert werden. Nach einer Zellzahl , werden die Proben dann zentrifugiert werden in Gefriermedium suspendiert. Die Proben werden in Gefriermedium nächsten zwischen Kryoröhrchen in einem ml Mengen aufgeteilt. Vials werden über Nacht in einem

-70 º C Gefrierschrank gelagert und bewegt, um langfristige Lagerung in flüssigem Stickstoff am nächsten Tag.
Sicher Auftauen

Kryoröhrchen aus flüssigem Stickstoff zu einem 37 º C Wasserbad überführt und die Probe erlaubt , um ein bis zwei Minuten auftauen . Eine warme Transportmedien zu jedem Fläschchen hinzugefügt . Verdünnte Zellsuspension wird sieben Minuten lang zentrifugiert. Die Anzahl und die Lebensfähigkeit der Zellen überprüft werden, wenn Zellen müssen konzentriert werden Proben sieben Minuten zentrifugiert. Die Probe wird auf Arbeitslösung verdünnt und ausgeruht für zwölf bis achtzehn Stunden vor Beginn Prüfung in der angegebenen Protokoll.