Biotinylierung Protokolle

Biotinylierung ist der Prozess der Verknüpfung von Biotin oder Vitamin H, ein Protein oder anderen Molekülen . Diese wissenschaftliche Vorgehensweise ist vor allem in der Biotechnologie und Molekularbiologie Forschung an DNA , Proteinen und Antigenen, die Moleküle sind die körpereigenen Immunsystems erkennen als Invasoren eingesetzt. Biotinylierung Protokolle umfassen die Biotinylierung von Antikörpern und Peptiden , sowie Zelloberflächen -Biotinylierung . Biotinylierung von Antikörpern

Biotin , Antikörper zu produzieren Proteine ​​zu verknüpfen , wenn ein Antigen in den Körper gelangt , Techniker verwenden Natriumbicarbonat ( NaHC03 ) bei pH 9; Dimethylsulfoxid ( DMSO);

NHS -Biotin -und eine Kochsalz Substanz namens PBS . Proben werden mit Natriumbicarbonat , die später auf NHS -Biotin in DMSO gemischt. Die Lösung wird dann auf die analysierten Antikörper zugegeben und auf ein Gerät genannt Rotator vier Stunden bei Raumtemperatur oder über Nacht bei 39,2 Grad Celsius inkubiert. Schließlich wird die Lösung mit PBS verdünnt.
Zelloberfläche Biotinylierung

In der Zelloberfläche Biotinylierung Protokoll , Techniker verwenden Gewebekultur, Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung ( PBS) bei pH 7,4 und Sulfosuccinimidyl -2-( biotinamido ) ethyl -1 ,3- dithiopropionat Pufferlösung Säure Aminogruppen enthaltenden TrisCl Ausgleich nach Current Protocols in Protein Science.The Zellen mit Biotin und der Pufferlösung gemischt , dekantiert und zentrifugiert, . Feststoffgehalt und spezifische Proteine ​​werden später auf einer Gel-Elektrophorese Platte analysiert.
Biotinylierung von Peptiden

Um die Biotinylierung von Peptiden durchzuführen, ist das Reagenz verwendet NHS Biotin -SS , nach Philip Shepherd in " Monoklonale Antikörper: . A Practical Approach " Peptide sind kurze Fragmente von Aminosäuren , die Moleküle, Proteine ​​und DNA bilden. In diesem Protokoll wird die kommerzielle Lösung NHS -SS Biotin in Wasser gelöst. Dann wird die Peptidprobe wird zusammen mit Natriumbicarbonat auf pH Säure oder gutgeschrieben . Die Lösung wird dann auf Eis für zwei Stunden inkubiert. Techniker können die Probe mit oder ohne die Biotin-Moleküle zu beobachten.