Wie variiert die Menge der BAPNA-Verdauung mit der Zeit?

Die Verdauung von BAPNA (Benzoyl-DL-Arginin-p-Nitroanilid) durch Trypsin folgt der typischen Michaelis-Menten-Enzymkinetik. Die Verdauungsgeschwindigkeit nimmt zunächst mit der Zeit zu, da mehr Enzymmoleküle an der Reaktion beteiligt sind. Da jedoch die Substratkonzentration mit der Zeit abnimmt, verlangsamt sich die Verdauungsgeschwindigkeit. Die Beziehung zwischen der verdauten BAPNA-Menge und der Zeit kann durch die folgende Gleichung beschrieben werden:

[BAPNA]t =[BAPNA]0 - k[E][BAPNA]0*t

Wo:

- [BAPNA]t:Menge an BAPNA, die zum Zeitpunkt t verdaut wurde

- [BAPNA]0:Anfangskonzentration von BAPNA

- k:Geschwindigkeitskonstante für die Reaktion

- [E]:Konzentration von Trypsin

- t:Zeit

Die Auftragung von [BAPNA]t gegen t zeigt typischerweise eine hyperbolische Kurve. Die anfängliche lineare Phase der Kurve stellt den Zeitraum dar, in dem die Reaktionsgeschwindigkeit konstant und proportional zur Enzymkonzentration ist. Mit fortschreitender Reaktion flacht die Kurve aufgrund der Substratverarmung und der abnehmenden Verdauungsgeschwindigkeit ab.

Durch Messen der Anfangsgeschwindigkeit (Vo) der Reaktion und Bestimmen der Michaelis-Menten-Konstante (Km) durch grafische Analyse (z. B. Lineweaver-Burk- oder Hanes-Woolf-Diagramme) ist es möglich, die Enzymkinetik zu charakterisieren und Einblicke in die Katalyse zu gewinnen Effizienz und Substrataffinität von Trypsin für BAPNA.