Zell-Lyse -Protokolls zur Proteinisolierung

Kleine Proteine ​​können synthetisch hergestellt werden, aber aus vielen Gründen gibt es keine synthetische Maschinen besser als die Zelle selbst . Typischerweise ist der erste Schritt bei der Proteinisolierung Zelllyse . Zell-Lyse
In Zell-Lyse , die Membran um den Zell Brüche .

Das Wort " Lyse " kommt von einer griechischen Wurzel mit der Bedeutung " zu lockern . " Zell-Lyse werden die Kräfte, die die Zellmembran gestört zusammen , dass es zum Bruch . Der Inhalt der Zelle wird dann in die umgebende Lösung , einschließlich des Proteins von Interesse freigesetzt. Üblicherweise wird dies durch die Zugabe einer chemischen Lösung namens Lysepuffer getan .
Vorbereitung Lysis Buffer
Die Wahl der Lyse-Puffer wird vom Zelltyp , dem Protein und der Anwendung ab .

Eine Vielzahl von verschiedenen Lyse -Lösungen sind im Handel erhältlich oder gemeinsame Rezepte können zur Lyse-Puffer von üblichen Chemikalien herzustellen. Die besten zu verwendenden Puffers wird in Abhängigkeit von der verwendeten Zelltyp , das Protein isoliert und der Endanwendung variieren, aber im allgemeinen eine Lyse -Lösung ein Detergens -Molekül (oft NP -40 oder Triton -X) , die die Zelle löst Membran , zusammen mit Puffern, Chelatoren und Protease-Inhibitoren , um das Protein nicht beschädigt wird einmal von der schützenden Umgebung der Zelle freigesetzt.
Lyse AGB
Darstellende Lyse unter eiskalten Bedingungen verhindert die Beschädigung des Proteins von Interesse .

Lysepuffer wird normalerweise verwendet, eiskalt, und die Lyse- Verfahren darf in der Kälte gehen . Die Lösung wird vorsichtig geschwenkt, um eine gleichmäßige Dispersion der Zellen und Lyse Zeugnisse. Nach etwa 5 bis 10 Minuten wird die Lyse -Lösung neutralisiert, um weitere Regel -Aktivität zu verhindern. Diese Vorsichtsmaßnahmen Schäden an der Protein verringern und Menge der Fremd Schutt produziert werden , die später entfernt werden.
Andere Lyse-Verfahren
Mechanische Kraft kann auch verwendet werden, um Zellen zu lysieren werden.

Obwohl chemische Lyse ist die schonendste und am häufigsten verwendet wird, können härtere mechanische Verfahren zum Lysieren von Zellen in einigen Fällen verwendet werden . Dazu gehören Beschallung, wiederholte Frost -Tau-Zyklen und Homogenisierung , die eine Maischeprozesses ist . Konsultieren Sie die Fachliteratur , um die am besten geeignete Methode für Ihren speziellen Fall zu finden.